Universal SYBR GREEN qPCR Premix (Biru)

Ucing No: HCB5041B

Pakét: 5ml

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) mangrupakeun pre-solusi pikeun 2 × real-time kuantitatif Gedekeun PCR dicirikeun ku sensitipitas tinggi na spésifisitas.

Kirim Pananya

Panjelasan Produk

rinci produk

Ucing No: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) mangrupakeun pre-solusi pikeun 2 × real-time kuantitatif Gedekeun PCR dicirikeun ku sensitipitas tinggi na spésifisitas, nyaeta bulao dina warna, sarta boga pangaruh tracing tambahan sampel.Komponén inti Taq DNA polymerase ngagunakeun mimiti panas antibodi pikeun sacara efektif ngahambat amplifikasi non-spésifik kusabab anil primer salami persiapan sampel.Dina waktu nu sarua, rumus nambihan faktor promosi pikeun ngaronjatkeun efisiensi Gedekeun réaksi PCR na equalize Gedekeun gén kalawan eusi GC béda (30 ~ 70%), jadi PCR kuantitatif bisa ménta hubungan linier alus dina kuantitatif lega. wewengkon.Produk ieu ngandung pewarna rujukan pasip ROX khusus, anu tiasa dianggo pikeun kalolobaan instrumen qPCR.Teu perlu nyaluyukeun konsentrasi ROX dina instrumen béda.Ieu ngan diperlukeun pikeun nambahkeun primers na template pikeun nyiapkeun sistem réaksi pikeun amplifikasi.

saméméhna: Rnase A HC3905A

Teras: Multiplex qPCR Probe Premix HCB5051A

Komponén

Universal Blue qPCR Master Campur

Kaayaan neundeun

Produkna dikirimkeun nganggo bungkus és sareng tiasa disimpen dina -25 ℃ ~ -15 ℃ salami 18 bulan.Diperlukeun pikeun ngahindarkeun iradiasi cahaya anu kuat nalika nyimpen atanapi nyiapkeun sistem réaksi.

Spésifikasi

Konsentrasi	2×
Métode deteksi	SYBR
Métode PCR	qPCR
Polimérase	Taq DNA polimérase
Jenis sampel	DNA
Parabot aplikasi	Paling instrumen qPCR
Jenis produk	SYBR premix pikeun real-time fluoresensi kuantitatif PCR
Larapkeun ka (aplikasi)	Éksprési Gene

parentah

1.Sistem Réaksi

Komponén	Volume (μL)	Volume (μL)	Konsentrasi ahir
Universal SYBR GREEN qPCR Premix	25	10	1 ×
Primer Maju (10μmol/L)	1	0.4	0,2 μmol / L
Primer Balik (10μmol/L)	1	0.4	0,2 μmol / L
DNA	X	X
ddH₂O	nepi ka 50	nepi ka 20	-

[Catetan]: Campur tuntas sateuacan dianggo pikeun ngahindarkeun gelembung kaleuleuwihan tina oyag anu kuat.

a) Konsentrasi Primer: Konsentrasi Primer ahir nyaéta 0.2μmol/L, sarta ogé bisa disaluyukeun antara 0.1 jeung 1.0μmol/L sakumaha hade.

b) Konsentrasi citakan: Lamun citakan mangrupa solusi stock cDNA undiluted, volume dipaké teu kudu ngaleuwihan 1/10 tina total volume réaksi qPCR.

c) Éncér citakan: Disarankeun éncér larutan stok cDNA ku 5-10 kali.Jumlah optimal tina citakan ditambahkeun hadé lamun nilai Ct diala ku amplifikasi nyaeta 20-30 siklus.

d) Sistim Réaksi: Disarankeun make 20μL atanapi 50μL pikeun mastikeun efektivitas jeung repeatability of Gedekeun gén target.

e) Persiapan Sistim: Mangga nyiapkeun dina bangku super bersih tur nganggo tips na tabung réaksi tanpa résidu nuclease;Disarankeun make tips kalawan cartridges filter.Hindarkeun kontaminasi silang sareng kontaminasi aerosol.

2.Program réaksi

Program Standar

Lengkah siklus	Temp.	Waktos	Siklus
Denaturasi awal	95 ℃	2 mnt	1
Denaturasi	95 ℃	10 detik	40
Annealing / Extension	60 ℃	30 detik★	40
Tahap kurva lebur	Instrumén Defaults		1

Program Gancang

Lengkah siklus	Temp.	Waktos	Siklus
Denaturasi awal	95 ℃	30 detik	1
Denaturasi	95 ℃	3 detik	40
Annealing / Extension	60 ℃	20 detik★	40
Tahap kurva lebur	Instrumén Defaults		1

[Catetan]: Program gancang cocog pikeun sabagéan ageung gén, sareng program standar tiasa dicoba pikeun gén struktur sekundér kompléks individu.

a) Suhu jeung waktu Annealing: Mangga saluyukeun nurutkeun panjang Primer jeung target gén.

b) Akuisisi sinyal fluoresensi (★): Mangga atur prosedur ékspérimén numutkeun sarat dina paréntah pikeun ngagunakeun alat.

c) Kurva lebur: Program standar instrumen tiasa dianggo sacara normal.

3. Hasil Analisis

Sahenteuna tilu ulangan biologis diperlukeun pikeun percobaan kuantitatif.Saatos réaksina, kurva amplifikasi sareng kurva lebur kedah dikonfirmasi.

3.1 Kurva amplifikasi:

Kurva amplifikasi baku nyaéta S ngawangun.Analisis kuantitatif anu paling akurat lamun nilai Ct ragrag antara 20 jeung 30. Lamun nilai Ct kirang ti 10, perlu éncér template sarta ngalaksanakeun test deui.Nalika nilai Ct antara 30-35, perlu pikeun ngaronjatkeun konsentrasi citakan atawa volume sistem réaksi, ku kituna pikeun ngaronjatkeun efisiensi amplifikasi sarta mastikeun akurasi hasil analisis.Lamun nilai Ct leuwih gede ti 35, hasil tés teu bisa kuantitatif nganalisis éksprési gén, tapi bisa dipaké pikeun analisis kualitatif.

3.2 Kurva lebur:

Puncak tunggal kurva lebur nunjukkeun yén spésifisitas réaksi téh alus sarta analisis kuantitatif bisa dipigawé;lamun kurva lebur nembongkeun ganda atawa sababaraha puncak, analisis kuantitatif teu bisa dipigawé.Kurva lebur nembongkeun puncak ganda, sarta perlu pikeun nangtoskeun naha puncak non-target nyaeta Primer dimer atawa amplifikasi non-spésifik ku DNA agarose gél Éléktroforésis.Upami éta mangrupikeun dimer primer, disarankeun pikeun ngirangan konsentrasi primer atanapi ngadesain ulang primer kalayan efisiensi amplifikasi anu luhur.Lamun amplifikasi non-spésifik, mangga ningkatkeun suhu annealing, atawa redesign primers kalawan spésifisitas.

Catetan

Punten nganggo PPE anu diperyogikeun, sapertos jas lab sareng sarung tangan, pikeun mastikeun kasehatan sareng kasalametan anjeun！

Produk ieu ngan ukur pikeun panggunaan panalungtikan!