Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) nyaéta polipéptida untaian tunggal anu ngandung 4 beungkeut disulfida kalayan beurat molekul kira-kira 13,7 kDa.RNase A nyaéta éndoribonuklease anu sacara khusus nguraikeun RNA untaian tunggal dina résidu C jeung U.Sacara husus, pembelahan ngakuan beungkeut fosfodiester dibentuk ku 5′-ribosa nukléotida jeung gugus fosfat dina 3′-ribosa nukléotida pirimidin padeukeut, sahingga 2, 3′-fosfat siklik dihidrolisis jadi 3 pakait. Fosfat nukleosida (misalna pG-pG-pC-pA-pG dibelah ku RNase A pikeun ngahasilkeun pG-pG-pCp sareng A-PG).RNase A nyaéta anu paling aktip dina meulah RNA untai tunggal.Konsentrasi kerja anu disarankeun nyaéta 1-100μG / ml, cocog sareng sababaraha sistem réaksi.Konsentrasi uyah rendah (0-100 mM NaCl) tiasa dianggo pikeun motong RNA untaian tunggal, RNA untaian ganda, sareng ranté RNA anu dibentuk ku hibridisasi RNA-DNA.Sanajan kitu, dina konsentrasi uyah luhur (≥0.3 M), RNase A ngan husus cleaves RNA untaian tunggal.
RNase A paling ilahar dipaké pikeun miceun RNA salila persiapan DNA plasmid atawa DNA génomik. Naha atawa henteu DNase aktip salila prosés persiapan bisa kalayan gampang mangaruhan réaksi.Metodeu tradisional ngagolakkeun dina mandi cai tiasa dianggo pikeun nganonaktipkeun kagiatan DNase.Produk ieu henteu ngandung DNase sareng protease, sareng henteu peryogi perlakuan panas sateuacan dianggo.Salaku tambahan, produk ieu ogé tiasa dianggo dina percobaan biologi molekular sapertos analisis panyalindungan RNase sareng analisis sekuen RNA.
Kaayaan Panyimpenan
Produkna tiasa disimpen dina -25～-15 ℃, valid pikeun 2 taun.
parentah
Ieu salah sahiji metodeu umum pikeun nyiapkeun solusi panyimpenan RNase A.Ogé bisa disiapkeun kumétode séjénna numutkeun métode tradisional di laboratorium atawa literatur rujukan (sapertoslangsung leyur dina 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 atawa solusi Tris-NaCl)
1. Anggo 10 mM natrium asétat (pH 5.2) pikeun nyiapkeun 10 mg/mL larutan panyimpenan RNase A
2. Pemanasan dina 100 ℃ salila 15 mnt
3. Tiiskeun ka suhu kamar, tambahkeun 1/10 volume 1 M Tris-HCl (pH 7,4), saluyukeun pH na ka 7,4 (pikeuncontona, tambahkeun 500 ml 10g/ml larutan panyimpen RNase 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-rangkep dina -20 ℃ pikeun neundeun beku, nu bisa stabil nepi ka 2 taun.
[Catetan]: Nalika ngagolakkeun solusi RNaseA dina kaayaan nétral, présipitasi RNase bakal kabentuk;Kulub éta dina pH anu langkung handap, sareng upami aya présipitasi, éta tiasa dititénan, anu tiasa disababkeun ku ayana pangotor protéin.Lamun sedimen kapanggih sanggeus ngagolak, pangotor bisa dihapus ku centrifugation-speed tinggi (13000rpm), lajeng sub-dipak pikeun neundeun katirisan.
Inpo produk
| sinonim | Ribonuclease I;ribonuclease pankréas;Ribonuklease 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS No. | 9001-99-4 |
| Penampilan | bubuk lyophilized bodas |
| Beurat molekular | ~ 13,7 kDa (runtuyan asam amino) |
| Nilai Ph | 7.6 (rentang kagiatan 6-10) |
| Suhu anu cocog | 60 ℃ (Rentang kagiatan 15-70 ℃) |
| Agén ngaktipkeun | Na2+.K+ |
| Panghambat | Inhibitor Rnase |
| Métode inactivation | Teu tiasa dinonaktipkeun ku pemanasan, disarankeun ngagunakeun kolom centrifuge |
| Asalna | Sapi |
| Kalarutan | Leyur dina cai (10mg/ml) |
| Kaleungitan dina garing | ≤5,0% |
| Aktivitas énzim | ≥60 unit Kunitz/mg |
| Titik isoelektrik | 9.6 |
Catetan
Pikeun kasalametan sareng kasehatan anjeun, mangga paké jas lab sareng sarung tangan kanggo operasi.
