Multiplex Hiji Lengkah RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) mangrupikeun kit PCR kuantitatif multiplex dumasar kana RNA salaku citakan.Dina prosés percobaan, transkripsi sabalikna sareng PCR kuantitatif dilaksanakeun dina tabung anu sami, anu nyederhanakeun operasi ékspérimén sareng ngirangan résiko kontaminasi.Dina kit ieu, untaian cDNA munggaran sacara éfisién disintésis ku Reverse Transcriptase tahan panas sareng sacara kuantitatif diamplifikasi ku HotStart Tag DNA Polymerase.Kit utamana ngandung panyangga MP dioptimalkeun, campuran énzim, jsb. Solusi panyangga geus ngandung Mg2+jeung dNTP.Salaku tambahan, faktor anu tiasa sacara efektif ngahambat amplifikasi PCR non-spésifik sareng ningkatkeun efisiensi amplifikasi sababaraha réaksi qPCR ditambah, anu tiasa mastikeun efisiensi amplifikasi sareng ngalaksanakeun sababaraha réaksi amplifikasi.Sistem dUTP/UDG ditambahkeun pikeun sacara efektif nyegah résiko kontaminasi aerosol.
Komponén
1. panyangga
2. Campuran énzim
Spésifikasi
| Panas Mimitian | Diwangun-di mimiti panas |
| Métode deteksi | Deteksi Primer-usik |
| Métode PCR | Hiji hambalan RT-qPCR |
| Polimérase | Taq DNA polimérase |
| Jenis sampel | DNA |
Kaayaan Panyimpenan
Produkna dikirim ku és garing sareng tiasa disimpen dina -25 ~ -15 ℃ salami 1 taun.Sakuduna ulah seringbeku-ngalembereh.Disarankeun pikeun nyimpen nyalira.
parentah
1.Réaksi Sistim
| Komponén | Volume (μL) | Konsentrasi ahir |
| 2 × MP panyangga | 12.5 | 1 × |
| Énzim Campuran | 1 | - |
| Campuran Primer/Probe (2,5 μM) | 3 | 0,3μM |
| Citakan RNA | 1-10 | - |
| RNase bébas H2O | nepi ka 25 | - |
Catetan:
Pastikeun pikeun nyampur ogé saméméh pamakéan, ulah aya gelembung kaleuleuwihan disababkeun ku Geter telenges.
a.Konsentrasi Primer: Campuran Primer kaasup Primer Multiplex, gumantung kana situasi Konsentrasi Primer optimal meureun antara 0.l jeung 1.0μM.
b.Konsentrasi usik: campuran usik kaasup multiplex usik panyiri bédana grup fluoresensi, gumantung kana situasi konsentrasi usik optimal meureun antara 0,05 jeung 0,5μM.
c.Éncér template: qPCR sensitip pisan sareng disarankeun pikeun éncér template.Nilai Ct kontrol cocog antara 20 sareng 35.
d.Persiapan Sistim: Mangga nyiapkeun dina tabel kerja ultra bersih, sarta pipettor na tube réaksi tanpa résidu nuclease;Disarankeun make sirah gun jeung unsur filter.Hindarkeun kontaminasi silang sareng kontaminasi aerosol.
2. Dioptimalkeun NgabuburitProtokol
| Siklus lengkah | Temp. | Waktos | Siklus |
| Transkripsi sabalikna | 50 ℃a | 20 mnt | 1 |
| Awal-denaturasi | 95 ℃ | 5 mnt | 1 |
| Réaksi amplifikasi | 95 ℃ | 15 detik |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 detik c |
Catetan:
a.Transkripsi sabalikna: Suhu tiasa milih 42 ° C atanapi 50 ° C.
b.Réaksi amplifikasi: Suhu disaluyukeun nurutkeun nilai Tm tina primers dirancang.
c.Akuisisi sinyal fluoresensi: Punten atur prosedur ékspérimén numutkeun sarat tina manual alat.
Catetan
Punten nganggo PPE anu diperyogikeun, sapertos jas lab sareng sarung tangan, pikeun mastikeun kasehatan sareng kasalametan anjeun.
