2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Cat No: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) dirancang pikeun ngalakukeun PCR langsung tina sampel tanpa ékstraksi DNA atanapi persiapan sampel.Reagen ieu diwangun ku hot-start DNA polymerase, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl.2, dNTPs (kalawan dUTP tinimbang dTTP), sarta penstabil, pikeun PCR kuantitatif (qPCR).réagen Ieu preforms tinggi inhibitor-toleransi, sahingga eta bisa langsung dilarapkeun ka deteksi sampel kawas swab tikoro, ciduh, anti coagulated sakabeh getih, plasma, sarta sérum tanpa ékstraksi DNA.Réagen ngagunakeun panyangga proprietary pikeun qPCR kalayan campuran énzim polimérase DNA anti-inhibitory sareng énzim UNG.Ku alatan éta, éta bisa ménta amplifikasi alus gén target dina sampel ngandung sambetan jeung ngahambat amplifikasi positif palsu disababkeun ku PCR residual jeung polusi aerosol.Réagen ieu cocog sareng kalolobaan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi, sapertos Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche sareng saterasna.
Komponén
1. 50×SensiDirect Énzim / UNG Campur
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Kaayaan neundeun
Sadaya komponén kedah dijaga dina -20 ℃ pikeun neundeun jangka panjang sareng 4 ℃ dugi ka 3 bulan.Mangga gaul tuntas sanggeus thawing na centrifuge saméméh ngagunakeun.Hindarkeun sering freeze-thaw.
Protokol Ngabuburit
| Lengkah | Suhu | Waktos | Siklus |
| nyerna | 50 ℃ | 2 mnt | 1 |
| Aktivasina polimérase | 95 ℃ | 1-5 mnt | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Annealing / Extension | 56-64 ℃ | 20-60s |
Pipetting Parentah
| Réagén | Volume per réaksi | Volume per réaksi | Konsentrasi ahir |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12,5 µL | 25µL | 1 × |
| 50×SensiDirect Énzim / UNG Campur | 0,5µL | 1µL | 1 × |
| 25×Primer-usik Campur1, 2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| Sampel3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Total volume | 25 μL | 50 μL | - |
1. Konsentrasi ahir primer biasana 0.2μM.Pikeun hasil anu langkung saé, konsentrasi primer tiasa dioptimalkeun dina kisaran 0.2-1μM.
2. Sacara umum, konsentrasi usik bisa dioptimalkeun dina lingkup 0.1-0.3μM.Konsentrasi optimal tina panyilidikan aya hubunganana sareng alat amplifikasi PCR waktos nyata, jinis panyilidikan, sareng jinis zat labél fluoresensi.Mangga tingal manual alat atawa sarat husus unggal usik fluoresensi.
3. tipena béda sampel ngandung tipena béda jeung eusi inhibitor jeung nomer salinan gén target.Volume sampel kudu dianggap ku kaayaan sabenerna.Jieun éncér tina sampel ku nambahkeun cai nuklease bébas atawa TE Buffer, lamun perlu.
4. Dianjurkeun volume sampel béda:
| Sampel | Volume pikeun hiji 50 μL réaksi | maksimal babandingan |
| Anticoagulated sakabeh getih | 2,5 l | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Sérum | 10 μL | 20% |
| Ngusap tikoro | 10 μL | 20% |
| Ciduh | 10 μL | 20% |
Kontrol kualitas
1. Deteksi fungsi: sensitipitas, spésifisitas sareng kaulangan qPCR.
2. Taya aktivitas nuclease exogenous: euweuh endonuclease exogenous na polusi exonuclease.
Catetan ngeunaan Produk
1. Produk ieu nganggo jinis novél polimérase DNA mimiti panas, anu tiasa diaktipkeun dina menit 1-5. Kusabab panyangga réaksina parantos dioptimalkeun, éta langkung cocog pikeun PCR kuantitatif fluoresensi ganda atanapi sababaraha nganggo metode usik.
2. Upami nilai Rn tina amplifikasi PCR rendah teuing atanapi amplifikasi écés ngahambat, ngirangan jumlah sampel, ningkatkeun volume réaksi atanapi éncér saméméhna tina sampel tiasa ningkatkeun hasil.
3. Kumpulan getih, ciduh, cikiih, swab tikoro, jeung sajabana kudu nuturkeun sarat kriteria klinis, sarta sampel seger bisa dipaké pikeun nyegah degradasi asam nukléat.
4. Kusabab amplicons béda boga efisiensi utilization béda mun dUTP na sensitipitas ka UNG, réagen kudu dioptimalkeun lamun sensitipitas deteksi nurun nalika ngagunakeun sistem UNG.Mangga ngahubungan kami pikeun rojongan teknis lamun diperlukeun.
5. Pikeun nyegah amplifikasi produk PCR carryover antara réaksi hiji-hambalan, wewengkon ékspérimén dedicated sarta pipette diperlukeun pikeun amplifikasi.Beroperasi nganggo sarung tangan sareng sering ganti sareng ulah muka tabung réaksi saatos amplifikasi PCR.
