Liar Taq DNA Polimérase
Taq DNA Polymerase nyaéta DNA polimérase termostabil ti Thermus aquaticus YT-1, nu mibanda aktivitas polimérase 5′→3′ jeung aktivitas endonuklease 5′ flap.
Komponén
| Komponén | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10 × Taq panyangga | 2 × 1 ml | 2 × 10 ml | 2 × 50 ml | 5 × 200 ml |
| Taq DNA Polimérase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5 × 10 ml |
Kaayaan Panyimpenan
Transportasi handapeun 0 ° C sarta disimpen dina -25 ° C ~ -15 ° C.
Harti Unit
Hiji unit dihartikeun salaku jumlah énzim nu ngasupkeun 15 nmol dNTP kana bahan teu leyur asam dina 30 menit dina 75 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kamurnian Protéin (SDS-PAGE):Kamurnian polimérase DNA Taq ≥95% ditangtukeun ku analisis SDS-PAGE.
2.EndKagiatan onuclease:Minimal 5 U tina Taq DNA polymerase sareng 1 μg λDNA salami 16 jam dina suhu 37 ℃ henteu ngahasilkeun degradasi anu tiasa dideteksi sakumaha anu ditangtukeun.
3.Kagiatan Exonuclease:Minimal 5 U tina Taq DNA polymerase sareng 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA salami 16 jam dina suhu 37 ℃ henteu ngahasilkeun degradasi anu tiasa dideteksi sakumaha anu ditangtukeun.
4.Kagiatan Nickase:Minimal 5 U tina Taq DNA polymerase sareng 1 μg pBR322 DNA salami 16 jam dina suhu 37°C henteu ngakibatkeun degradasi anu tiasa dideteksi sakumaha anu ditangtukeun.
5.Kagiatan RNase:Minimal 5 U tina Taq DNA polymerase sareng 1,6 μg MS2 RNA salami 16 jam dina suhu 37°C henteu nyababkeun degradasi anu tiasa dideteksi sakumaha anu ditangtukeun.
6.E. coliDNA:5 U tina Taq DNA polymerase disaring pikeun ayana E. coli DNA génomik maké TaqMan qPCR kalawan primers husus pikeun E. coli 16S rRNA locus.Kontaminasi DNA génomik E. coli nyaéta ≤1 Salinan.
7.Amplifikasi PCR (5.0 kb DNA Lambda)- Réaksi 50 µL ngandung 5 ng Lambda DNA sareng 5 unit Taq DNA Polymerase pikeun 25 siklus amplifikasi PCR ngahasilkeun produk anu diperkirakeun 5.0 kb.
Setup Réaksi
| Komponén | Jilid |
| DNA templatea | pilihan |
| Primer Maju 10 μM | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| Campuran dNTP (masing-masing 10mM) | 1 μL |
| 10×Taq panyangga | 5 μl |
| Taq DNA Poliméraseb | 0,25 μL |
| Cai bébas nukléasi | Nepi ka 50 μL |
Catetan:
1) Konsentrasi réaksi optimal témplat béda béda.Tabel di handap ieu nunjukkeun panggunaan citakan anu disarankeun pikeun sistem réaksi 50 µL.
| DNA | Jumlah |
| génomik | 1 ng-1 ug |
| Plasmid atanapi Viral | 1 pg-1 ng |
2) Konsentrasi optimal Taq DNA Polimérase bisa rupa-rupa ti 0,25 µL~1 µL dina aplikasi husus.
RéaksiProgram
| Lengkah | Suhu(°C) | Waktos | Siklus |
| Denaturasi awala | 95 ℃ | 5 mnt | - |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Siklus |
| Anilb | 60 ℃ | 15 s | |
| Ékstensi | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Extension Final | 72 ℃ | 5 mnt | - |
Catetan:
1) Kaayaan denaturasi awal cocog pikeun kalolobaan réaksi amplifikasi sareng tiasa dirobih dumasar kana pajeulitna struktur template.Lamun struktur template kompléks, waktos pre-denaturasi bisa diperpanjang nepi ka 5 - 10mins pikeun ngaronjatkeun éfék denaturation awal.
2) Suhu annealing kedah disaluyukeun dumasar kana nilai Tm tina primer, anu umumna disetel ka 3 ~ 5 ℃ langkung handap tina nilai Tm tina primer;Pikeun témplat kompléks, perlu pikeun nyaluyukeun suhu annealing tur manjangkeun waktos extension pikeun ngahontal amplifikasi efisien.
