Superstart qPCR Premix plus-UNG
Ucing No: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG mangrupikeun réagen khusus anu dirancang pikeun réaksi kualitatif sareng kuantitatif PCR Real Time ngagunakeun deteksi dumasar-usik, dikembangkeun khusus pikeun prosés lyophilization.Ieu ngandung énzim hot-start anyar Hotstart Taq plus (DG), nu miboga aktivitas énzim Taq na disegel dina suhu kamar, éféktif ngahambat amplifikasi non-spésifik disababkeun ku primer non-spésifik annealing atawa formasi dimer primer dina kaayaan suhu low, sahingga ngaronjatkeun spésifisitas réaksi amplifikasi.Réagen ieu ngagunakeun panyangga khusus qPCR anu dioptimalkeun sareng sistem anti kontaminasi UNG / dUTP pikeun ngahontal ngamimitian panas gancang, ningkatkeun efisiensi sareng sensitipitas réaksi qPCR.Éta tiasa kéngingkeun kurva standar anu saé dina sajumlah daérah kuantitatif sareng akurat ngalaksanakeun kuantitas, sacara efektif nyegah amplifikasi positip palsu anu disababkeun ku produk PCR residual atanapi kontaminasi aerosol.Réagen ieu cocog sareng kalolobaan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi ti pabrik sapertos Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad sareng Roche jsb, sareng nunjukkeun stabilitas anu saé dina bentuk lyophilized.
Komposisi réagen
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bébas) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (opsional)
Kaayaan Panyimpenan
Panyimpen jangka panjang dina -20 ℃;bisa disimpen dina 4 ℃ nepi ka 3 bulan.Campur ogé saméméh pamakéan sartaulah terus-terusan katirisan sareng thawing.
Protokol Ngabuburit
| Prosedur | Temp. | Waktos | Siklus |
| nyerna | 50 ℃ | 2 mnt | 1 |
| Aktivasina polimérase | 95 ℃ | 1~5 mnt | 1 |
| Denatur | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Annealing jeung Extension | 56~64 ℃ | 20 ~ 60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Réaksi Sybobot Persiapan
|
Komposisi |
Volume 25µL |
Volume 50µL |
Konsentrasi ahir |
| 5×HotstartPremix tambah-UNG(Mg2+bébas) (DG) | 5µL | 10µL | 1 × |
| 250 mM MgCl2 | 0,45µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4 × lioprotektor1 | 6,25µL | 12,5 µL | 1 × |
| 25×Primer-usik Campur2 | 1µL | 2µL | 1 × |
| DNA template3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Nepi ka 25µL | Nepi ka 50µL | —— |
1. A konsentrasi ahir 0.2μM pikeun primers biasana ngahasilkeun hasil alus;lamun kinerja réaksi goréng, saluyukeun konsentrasi primer dina rentang 0.2-1μM sakumaha diperlukeun.Konsentrasi usik ilaharna dioptimalkeun dina rentang 0.1-0.3μM ngaliwatan percobaan gradién pikeun manggihan kombinasi optimal.
2. Jumlah salinan gén target anu dikandung dina tipena béda témplat variasina;lamun perlu, éncér gradién bisa dipigawé pikeun nangtukeun jumlah tambahan template optimal.
3. Sistim ieu bisa lyophilized;lamun konsumén make sistem ieu tanpa syarat katirisan-drying, 4 × lyoprotectant bisa selektif ditambahkeun; lamun aya produk freeze-garing diperlukeun, salila réagen cair tahap validasi kinerja produk, éta kudu nambahan 4 × lyoprotectant pikeun mastikeun konsistensi jeung komponén sistem lyophilized. jeung épék.
Nalika sistem dianggod pikeun freeze-drying, nyiapkeun sistem as handap:
| Komposisi | 25µL Sistem Réaksi |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+bébas) (DG) | 5µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45µL |
| 4 × lioprotektor | 6,25µL |
| 25×Primer-usik Campur | 1µL |
| ddH2O | Nepi ka 18 ~ 20µL |
* Lamun sistem séjén pikeun freeze-drying diperlukeun, mangga konsultasi misah.
Prosés Lyophilizationss
| Prosedur | Temp. | Waktos | Kaayaan | Tekanan |
| Pra-katirisan | 4 ℃ | 30 mnt | Tahan |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 mnt | Niiskeun | ||
| -50 ℃ | 180 mnt | Tahan | ||
| Pangeringan primér | -30 ℃ | 60 mnt | Pemanasan |
Vakum pamungkas |
| -30 ℃ | 70 mnt | Tahan | ||
| Pangeringan sekundér | 25 ℃ | 60 mnt | Pemanasan |
Vakum pamungkas |
| 25 ℃ | 300 mnt | Tahan |
2. Prosés lyophilization di luhur téh pikeun rujukan wungkul.Jenis produk anu béda sareng pengering beku anu béda-béda gaduh parameter anu béda-béda, ku kituna panyesuaian tiasa dilakukeun dumasar kana saleresna.kaayaan nalika dianggo.
3. Prosés lyophilization béda bisa jadi cocog pikeun ukuran bets béda tina lyophilizedproduk, sahingga validasi tés anu cekap kedah dilakukeun nalika dianggo pikeun produksi skala ageung.
Parentah pikeun ngagunakeun lyophilized bubuk
1. Sakeudeung centrifuge bubuk lyophilized;
2. Tambahkeun citakan asam nukléat kana bubuk lyophilized tur nambahkeun cai nepi ka 25μL;
3. Campur ogé ku centrifugation tur ngajalankeun on mesin.
Kontrol kualitas:
1. nguji fungsi: sensitipitas, spésifisitas, reproducibility of qPCR.
2. Taya aktivitas nuclease exogenous, euweuh kontaminasi endo / exonuclease exogenous.
Inpormasi Téknis:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG ngagunakeun novél panas-mimiti énzim nu ngaktipkeun gancang panas-mimiti dina 1 ~ 5 menit;ngaliwatan rumusan panyangga husus éta cocog pikeun multiplex fluoresensi PCR réaksi kuantitatif.
2. Mibanda spésifisitas luhur nu nyata ngaronjatkeun sensitipitas fluoresensi kuantitatif deteksi wates PCR, nyieun kurva Gedekeun normalisasi, nilai fluoresensi ménta pamutahiran atra dina citakan konsentrasi low, cocog salaku sensitipitas tinggi fluoresensi kuantitatif PCR réagen deteksi.
3. Pikeun primers kalawan suhu annealing handap atawa leuwih panjang batan fragmen 200bp, metoda 3-hambalan dianjurkeun.
4. Efisiensi utilization of dUTP jeung sensitipitas ka énzim UNG béda pikeun gén target béda, sahingga lamun ngagunakeun sistem UNG ngabalukarkeun panurunan dina sensitipitas deteksi, sistem réaksi kudu disaluyukeun jeung dioptimalkeun.Upami dukungan téknis diperyogikeun mangga ngahubungi perusahaan kami.
5. Paké wewengkon dedicated sarta pipettes saméméh jeung sanggeus Gedekeun, ngagem sarung salila operasi sarta ngaganti aranjeunna remen;ulah muka tabung réaksi sanggeus parantosan PCR pikeun ngaleutikan kontaminasi sampel ku produk PCR.
