Inhibitor Rnase
Inhibitor Murine RNase mangrupikeun inhibitor RNase murine rékombinan anu dikedalkeun sareng dimurnikeun tina E.coli.Ieu ngiket ka RNase A, B atawa C dina nisbah 1:1 ngaliwatan beungkeutan non-kovalén, kukituna ngahambat aktivitas tilu énzim tur ngajaga RNA tina degradasi.Nanging, éta henteu efektif ngalawan RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H atanapi RNase ti Aspergillus.Inhibitor Murine RNase diuji ku RT-PCR, RT-qPCR sareng IVT mRNA, sareng cocog sareng sababaraha transkripase Reverse komérsial, polimérase DNA sareng polimérase RNA.
Dibandingkeun sareng sambetan RNase manusa, sambetan RNase murine henteu ngandung dua sistein anu sénsitip pisan kana oksidasi anu nyababkeun inactivation tina inhibitor.Éta ngajantenkeun stabil dina konsentrasi DTT anu rendah (kirang ti 1 mM).Fitur ieu ngajadikeun eta cocog pikeun dipaké dina réaksi dimana konsentrasi luhur DTT ngarugikeun réaksi (misalna Real-time RT-PCR).
Application
Produk ieu tiasa dianggo sacara lega dina percobaan naon waé dimana gangguan RNase mungkin pikeun nyegah degradasi RNA, sapertos:
1.Sintésis untaian munggaran cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, jsb.
2.Ngajagi RNA tina degradasi salami transkripsi/terjemahan in vitro (contona, sistem réplikasi virus in vitro).
3.Inhibisi aktivitas RNase salila separation RNA jeung purifikasi.
Kaayaan Panyimpenan
Produkna tiasa disimpen dina -25～- 15 ℃, valid pikeun 2 taun.
Panyangga gudang
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 mM DTT jeung 50% gliserol.
Harti Unit
Jumlah inhibitor RNase murine diperlukeun pikeun ngahambat aktivitas 5ng of ribonuclease A ku 50% diartikeun salaku hiji unit (U).
Beurat molekular protéin
Beurat molekular inhibitor RNase murine nyaéta 50 kDa.
Kontrol kualitas
Exonuclease Kagiatan:
40 U tina inhibitor RNase murine kalawan 1 μg λ -Hind III nyerna DNA dina 37 ℃ salila 16 jam teu ngahasilkeun degradasi sakumaha ditangtukeun ku éléktroforésis gél agarose.
Aktivitas Endonuklease:
40 U tina murine RNase inhibitor kalawan 1μg λ DNA dina 37 ℃ salila 16 jam teu ngahasilkeun degradasi sakumaha ditangtukeun ku éléktroforésis gél agarose.
Nyentak Kagiatan:
40U tina inhibitor RNase murine kalawan 1μg pBR322 dina 37 ℃ salila 16 jam teu ngahasilkeun degradasi sakumaha ditangtukeun ku éléktroforésis gél agarose.
RNase Kagiatan:
40U of murine RNase inhibitor kalawan 1.6μg MS2 RNA pikeun 4h dina 37 ℃ ngahasilkeun euweuh degradasi sakumaha ditangtukeun ku éléktroforésis gél agarose.
E.coli DNA:
40 U of murine RNase inhibitor disaring pikeun ayana E. coli DNA génomik maké TaqMan qPCR kalawan primers husus pikeun E. coli 16S rRNA locus.Kontaminasi DNA génomik E. coli nyaéta ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1.Violent osilasi atawa aduk bakal ngakibatkeun énzim inactivation.
2.The rentang hawa optimum ieu inhibitor éta 25-55 ℃, sarta Ieu inactivated di 65 ℃ na luhur.
3. Kagiatan RNase H, RNase 1 jeung RNase T1 teu dihalangan ku murine RNase inhibitor.
4.The inhibisi aktivitas RNase kapanggih dina rupa-rupa pH (pH 5-9 éta sakabéh aktip), sarta aktivitas pangluhurna dititénan dina pH 7-8.
5. Kusabab ribonucleases ilaharna nahan aktivitas dina kaayaan denaturing, care kudu dilaksanakeun pikeun nyegah denaturing molekul RNase Inhibitor nu geus complexed kalawan ribonuclease a.Pikeun nyegah sékrési ribonuclease aktip, suhu leuwih gede ti 50 °C jeung konsentrasi luhur uréa atawa agén denaturing séjén kudu dihindari.
