Hotstart Taq DNA Polimérase
Hot Start Taq DNA Polymerase (modifikasi Antibodi) nyaéta polimérase DNA termostabil mimiti panas ti Thermus aquaticus YT-1, anu mibanda aktivitas polimérase 5′→3′ jeung aktivitas endonuklease flap 5′.The hot-start Taq DNA polymerase nyaéta Taq DNA polymerase anu dirobih ku antibodi Taq thermolabile.Modifikasi antibodi ningkat spésifisitas, sensitipitas, sareng ngahasilkeun PCR.
Komponén
| Komponén | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq panyangga | 4 × 1 ml | 4 × 10 ml | 4 × 50 ml | 5 × 400 ml |
| Hot Start Taq DNA Polimérase (Antibodi dirobah) (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 10 × 5 ml |
Aplikasi
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 dina 25 ℃), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 jeung 50% Gliserol.
Kaayaan Panyimpenan
Transportasi handapeun 0 ° C sarta disimpen dina -25 ° C ~ -15 ° C.
Harti Unit
Hiji unit dihartikeun salaku jumlah énzim nu ngasupkeun 15 nmol dNTP kana bahan teu leyur asam dina 30 menit dina 75 ° C.
Kontrol kualitas
1.EndKagiatan onuclease:Inkubasi 20 U énzim sareng 4 μg pUC19 DNA salami 4 jam dina 37 ℃ nyababkeun henteu aya degradasi DNA anu tiasa didéteksi sakumaha anu ditangtukeun ku éléktroforésis gél.
2.5 kb Lambda PCR:25 Siklus amplifikasi PCR 5 ng Lambda DNA sareng 1,25 unit Taq DNA Polymerase ku ayana 200 µM dNTPs sareng 0,2 µM primers ngahasilkeun produk anu diperkirakeun 5 kb.
3.Kagiatan Exonuclease:Inkubasi réaksi 50 µl ngandung minimum 12,5 U tina Taq DNA Polimérase jeung 10 nmol 5'-FAM oligonucleotide salila 30 menit dina suhu 37 ℃ teu ngahasilkeun degradasi.
4.Kagiatan RNase:Inkubasi 10 µL réaksi ngandung 20 U énzim jeung 1μg transkrip RNA salila 2 jam dina 37 ° C teu ngakibatkeun degradasi RNA nu bisa didéteksi sakumaha ditangtukeun ku éléktroforésis gél.
5.Inactivation panas:No.
Sistem Réaksi
| Komponén | Jilid |
| DNA templatea | pilihan |
| Primer Maju 10 μM | 0,5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0,5 μL |
| Campuran dNTP (masing-masing 10mM) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq panyangga | 5 μl |
| Taq DNA Poliméraseb(5U/μL) | 0,125 μL |
| Cai bébas nukléasi | Nepi ka 25 μL |
Catetan:
1) a.
| DNA | Jumlah |
| génomik | 1 ng-1 ug |
| Plasmid atanapi Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Konsentrasi optimal Taq DNA Polimérase bisa rupa-rupa ti 5-50 unit/mL (0.1-0.5 unit/25 µL réaksi) dina aplikasi husus.
protokol Ngabuburit termal
PCR
| Lengkah | Suhu(°C) | Waktos | Siklus |
| Denaturasi awala | 95 ℃ | 1-3 mnt | - |
| Denaturasi | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 Siklus |
| Anilb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Ékstensi | 68 ℃ | 1 kb/min | |
| Extension Final | 68 ℃ | 5 mnt | - |
Catetan:
1) Denaturasi awal 1 mnt dina 95 ° C cukup pikeun kalolobaan amplifikasi.Pikeun témplat anu hésé, denaturasi anu langkung panjang 2-3 menit dina 95 ° C disarankeun.Kalayan PCR koloni, denaturasi awal 5 menit dina 95 ° C disarankeun.
2) Léngkah annealing biasana 15-60 s.Suhu anil dumasar kana Tm tina pasangan primer sareng biasana 45-68 ℃.
