Suhu Sensitip UNG
Suhu Sensitip UNG (TS-UNG) nyaéta diala ku éksprési rékombinan dina E. coli.Énzim ngatalisan sékrési urasil bébas tina DNA untai tunggal sareng ganda anu ngandung urasil sareng teu aktif ngalawan RNA.Dibandingkeun sareng énzim UNG konvensional asal gén E. coli, énzim TS-UNG gaduh kagiatan anu langkung luhur dina suhu rendah (20 ℃ ~ 37 ℃) sareng sénsitip suhu sareng gampang dinonaktipkeun (50 ℃), ngahindarkeun degradasi amplifikasi anu ngandung dUTP. produk dina suhu kamar ku aktivitas sésa-sésa nu bisa tetep sanggeus inactivation tina énzim UNG konvensional.Ku alatan éta, énzim TS-UNG henteu ngan cocog pikeun réaksi pencegahan kontaminasi PCR, tapi ogé cocog sareng program amplifikasi RT-PCR sareng tiasa dianggo dina réaksi pencegahan kontaminasi RT-PCR.
Aplikasi Disarankeun
Amplifikasi Pencegahan Kontaminasi
Kaayaan Panyimpenan
-20 ° C pikeun neundeun jangka panjang, kudu dicampur ogé saméméh pamakéan, ulah sering freeze-ngalembereh.
Panyangga gudang
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabiliser, 50% Gliserol.
Harti Unit
Jumlah énzim anu diperlukeun pikeun nguraikeun 1µg DNA untai tunggal anu ngandung basa dU dina 1 jam dina suhu 37°C nyaéta 1 unit aktivitas (U).
Kontrol kualitas
1.SDS-PAGE purity electrophoretic leuwih gede ti 98%
2.Aktivitas degradasi, kontrol bets-to-batch, stabilitas
3.Henteu aya kagiatan nuklease eksogen, teu aya kontaminasi endonuklease atanapi kontaminasi exonuclease.
parentah
| Komponén | Volume (μL) | Konsentrasi ahir |
| 10 × PCR Buffer (gratis dNTP, Mg²+gratis) | 5 | 1 × |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (ngaganti dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × Primer Campura | 2 | 1 × |
| Citakan | - | <1 μg/réaksi |
| ddH₂O | Ka 50 | - |
Catetan: a: Lamun dipaké pikeun qPCR/qRT-PCR, usik fluoresensi kudu ditambahkeun kana sistem réaksi.Biasana, konsentrasi primer ahir 0,2 μM tiasa masihan hasil anu saé;lamun kinerja réaksi goréng, konsentrasi primer bisa disaluyukeun dina rentang 0.2-1 μM.Biasana, konsentrasi usik dioptimalkeun dina rentang 0.1-0.3 μM.Percobaan gradién konsentrasi bisa dipigawé pikeun manggihan kombinasi pangalusna tina primer jeung usik.
Catetan
1.Suhu réaksi optimal énzim TS-UNG relatif low, sarta eta bisa dioptimalkeun dina rentang 20 ℃ ~ 37 ℃, dosage énzim jeung waktu réaksi bisa dioptimalkeun dina rentang 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 mnt;jeung énzim bisa dinonaktipkeun dina prosés transkripsi sabalikna.
2.Éta cocog pikeun PCR sareng RT-PCR pikeun nyegah kontaminasi.
3.Hindarkeun sering freeze-thaw, sareng ulah kakeunaan fluktuasi suhu anu ageung.
4.Gén anu béda pikeun diamplifikasi gaduh efisiensi panggunaan anu béda tina dUTP sareng sensitipitas kana énzim UNG, janten, upami panggunaan sistem UNG nyababkeun panurunan sensitipitas deteksi, sistem réaksi kedah disaluyukeun sareng dioptimalkeun, upami anjeun peryogi dukungan téknis, mangga ngahubungi pausahaan urang.
