Énzim UDG/UNG
UDG (urasil DNA glikosilase) tiasa ngatalisan hidrolisis tautan N-glikosidik antara basa urasil sareng tulang tonggong gula-fosfat dina ssDNA sareng dsDNA.Gampang ngadalikeun polusi aerosol sareng cocog pikeun sistem biologi molekular umum sapertos PCR, qPCR, RT-qPCR sareng LAMP.
spésifikasi
| Host éksprési | Rekombinan E. coliwith uracil DNA glikosilase gén |
| Beurat Molekul | 24. 8kDa |
| Kasucian | ≥95% (SDS-Page) |
| Inactivation panas | 95 ℃, 5 ~ 10 mnt |
| Harti Unit | Hiji unit (U) dihartikeun salaku jumlah énzim nu diperlukeun pikeun ngatalisan hidrolisis l μg dU-ngandung dsDNA dina 30 menit dina 25 ℃. |
Panyimpenan
Produk kudu disimpen dina-25 ℃ ~ -15 ° C salila dua taun.
parentah
1.Nyiapkeun campuran réaksi PCR nurutkeun sistem handap
| Komponén | Volume (μL) | Konsentrasi ahir |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1 × |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol / L |
| DUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol / L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0,2 mmol / Leach |
| DNA template | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol / L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol / L |
| Taq DNA Polimérase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glikosilase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Nepi ka 50 | - |
Catetan: Numutkeun sarat ékspérimén, konsentrasi ahir dUTP tiasa disaluyukeun antara 0.2-0.6 mmol / L, sareng 0.2 mmol / L dTTP tiasa ditambah sacara selektif.
2.Prosedur amplifikasi
| Lengkah siklus | Suhu | Waktos | Siklus |
| dU-ngandung degradasi template | 25 ℃ | 10 mnt | 1 |
| aktivasina UDG, template denaturation awal | 95 ℃ | 5 ~ 10 mnt | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10 detik |
30-35 |
| Anil | 60 ℃ | 20 detik | |
| Ékstensi | 72 ℃ | 30 detik/kb | |
| extension final | 72 ℃ | 5 mnt | 1 |
Catetan: Waktu réaksi dina 25 ° C bisa disaluyukeun dina 5-10mins nurutkeun sarat eksperimen.
Catetan
1.UDG aktip dina kalolobaan panyangga réaksi PCR.
2.Énzim kedah disimpen dina kotak és atanapi dina mandi és nalika dianggo, sareng kedah disimpen dina suhu -20 ° C langsung saatos dianggo.
3.Punten nganggo PPE anu diperyogikeun, sapertos jas lab sareng sarung tangan, pikeun mastikeun kasehatan sareng kasalametan anjeun!
