Protéinase K NGS (bubuk)
Ucing No: HC4507A
NGS Protéase K nyaéta protease sérine stabil kalayan aktivitas énzim tinggi jeung spésifisitas substrat lega. Énzim preferentially decomposes beungkeut éster jeung beungkeut péptida padeukeut jeung C-terminal asam amino hidrofobik, asam amino nu ngandung walirang jeung asam amino aromatik.Janten, sering dianggo pikeun nguraikeun protéin janten péptida pondok.NGS Protease K nyaéta protease serine has sareng Asp39-Milikna69-Ser224triad katalitik anu unik pikeun protease serin, sareng pusat katalitik dikurilingan ku derek Ca.2+situs mengikat pikeun stabilisasi, ngajaga aktivitas énzim tinggi dina rentang lega kaayaan.
Spésifikasi
| Penampilan | Bubuk amorf bodas nepi ka bodas-pareum, lyophilized |
| Kagiatan husus | ≥40U/mg padet |
| DNase | Euweuh nu dideteksi |
| RNase | Euweuh nu dideteksi |
| Beungbeurat hayati | ≤50CFU/g padet |
| Résidu asam nukléat | <5pg/mg padat |
Pasipatan
| Sumber | albeum Tritirachium |
| Nomer EC | 3.4.21.64(Rekombinan tina albeum Tritirachium) |
| Beurat molekular | 29kDa (SDS-PAGE) |
| Titik isoelektrik | 7.81 Gbr.1 |
| pH optimum | 7.0-12.0 (Sadaya ngalakukeun aktivitas tinggi) Gbr.2 |
| Suhu optimum | 65 ℃ Gbr.3 |
| Stabilitas pH | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) Gbr.4 |
| Stabilitas termal | Di handap 50 ℃ (pH 8.0, 30min) Gbr.5 |
| Stabilitas gudang | Disimpen dina 25 ℃ salila 12months Gbr.6 |
| Aktipator | SDS, uréa |
| Inhibitor | Diisopropil fluorophosphate;bénzilsulfonil fluorida |
Kaayaan Panyimpenan
Nyimpen bubuk lyophilized dina -25 ~ -15 ℃ keur lila jauh ti lampu;Saatos disolusi, aliquot kana volume luyu pikeun neundeun jangka pondok dina 2-8 ℃ jauh ti lampu atawa gudang jangka panjang di -25 ~ -15 ℃ jauh ti cahaya.
Tindakan pancegahan
Anggo sarung tangan pelindung sareng kacasoca nalika nganggo atanapi timbangan, sareng tetep ventilasi saé saatos dianggo.Produk ieu tiasa nyababkeun réaksi alérgi kulit sareng iritasi panon anu serius.Upami diseuseup, éta tiasa nyababkeun alergi atanapi gejala asma atanapi dyspnea.Bisa ngabalukarkeun iritasi engapan.
Harti Unit
Hiji unit NGS Protéase K dihartikeun salaku jumlah énzim anu diperlukeun pikeun ngahidrolisis kasein jadi 1 μmol L-tirosin dina kaayaan determinasi standar.
Persiapan réagen
| Réagén | Produsén | Katalog |
| Casein teknistina susu sapi | Sigma Aldrich | C7078 |
| NaOH | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 10019762 |
| NaH2PO4· 2H2O | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 20040718 |
| Na2HPO4 | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 20040618 |
| asam trichloroacetic | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 80132618 |
| Natrium asétat | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 10018818 |
| asam asétat | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 10000218 |
| HCl | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 10011018 |
| Natrium karbonat | Sinopharm KimiaRéagén Co., Ltd. | 10019260 |
| Foline-fénol | Sangon Biotech (Shanghai)Co., Ltd. | A500467-0100 |
| L-tirosin | Sigma | 93829 |
Réagen I:
Substrat: 1% Casein tina leyuran susu bovine: ngaleyurkeun 1g bovine kasein susu dina 50ml 0.1M larutan natrium fosfat, pH 8.0, panas dina cai mandi dina 65-70 °C salila 15mins, aduk jeung bubarkeun, tiis jeung cai, disaluyukeun ku natrium hidroksida ka pH 8,0, sarta éncér kana 100ml.
Réagen II:
Solusi TCA: 0.1M asam trichloroacetic, 0.2M natrium asétat jeung 0.3M asam asétat (beuratna 1.64g asam trichloroacetic + 1.64g natrium asétat + 1.724mL asam asétat successively, tambahkeun 50mL cai deionized, saluyukeun jeung HCl 3. 100 ml).
Réagén III:
0,4m larutan natrium karbonat (beuratna 4,24g natrium karbonat anhidrat sareng leyur dina 100mL cai)
Réagen IV:
Réagen folin fénol: éncér 5 kali ku cai deionisasi.
Réagén V:
Énzim diluent: 0,1 M leyuran natrium fosfat, pH 8,0.
Réagén VI:
L-tirosin leyuran baku: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol / ml L-tirosin leyur kalawan 0,2M HCl.
Prosedur
1. Hurungkeun spéktrofotométer UV-Vis tur pilih ukuran fotométri.
2. Atur panjang gelombang salaku 660nm.
3. Hurungkeun mandi cai, set suhu ka 37 ℃, mastikeun hawa unchanged pikeun 3-5mins.
4. Preheat substrat 0.5mL dina tube centrifuge 2mL di 37 ℃ cai mandi pikeun 10mins.
5. Ékstrak 0.5mL solusi énzim éncér kana tabung centrifuge preheated salila 10 menit.Atur énzim éncér salaku gugus kosong.
6. Tambahkeun 1,0 mL TCA réagen langsung saatos réaksi.Campur ogé jeung incubate dina cai mandi salila 30 menit.
7. Solusi réaksi centrifugate.
8. Tambahkeun komponén di handap dina urutan dieusian.
| Réagén | Jilid |
| Supernatan | 0,5 ml |
| 0,4M natrium karbonat | 2,5 ml |
| Réagen folin fénol | 0,5 ml |
9. Campur ogé saméméh incubating dina cai mandi a 37 ℃ salila 30 mins.
10. OD660ieu ditangtukeun salaku OD1;grup kontrol kosong: Énzim diluent dipaké pikeun ngaganti solusi énzim pikeun nangtukeun OD660sakumaha OD2, ΔOD = OD1-OD2.
11. L-tirosin kurva baku: 0.5mL konsentrasi béda L-tirosin solusi, 2.5mL 0.4M Natrium karbonat, 0.5mL Folin réagen fénol dina 5mL tube centrifuge, incubate dina 37 ℃ pikeun 30mins, ngadeteksi keur OD660pikeun konséntrasi L-tirosin anu béda, teras dicandak kurva baku Y=kX+b, dimana Y nyaéta konsentrasi L-tirosin, X nyaéta OD.600.
Itungan
2: Total volume leyuran réaksi (mL)
0,5: Volume larutan énzim (mL)
0.5: Volume cairan réaksi dipaké dina determinasi kromogenik (mL)
10: Waktu réaksi (mnt)
Df: Éncér sababaraha
C: Konsentrasi énzim (mg/mL)
Angka
Gbr.1 résidu DNA
| Sampel | Ave C4 | Asam Nukléat Pamulihan (pg/mg) | Pamulihan (%) | Total Nukléat asam ( pg/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+STD2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| STD1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| STD2 | 16 | |||
| STD3 | 19.125 | |||
| STD4 | 23.135 | |||
| STD5 | 26.625 | |||
| H2O bébas RNA | Teu tangtu | — | — | — |
Gbr.2 pH optimum
Gbr.3 Suhu optimum
Gbr.4 Stabilitas pH
Gbr.5 Stabilitas termal
Gbr.6 Stabilitas gudang dina 25 ℃
