Mouse Genotyping Kit

Cat No: HCR2021A

Produk ieu mangrupikeun kit anu dirancang pikeun idéntifikasi gancang genotip beurit, kalebet ékstraksi kasar DNA sareng sistem amplifikasi PCR.Produkna tiasa dianggo pikeun amplifikasi PCR langsung tina buntut beurit, ceuli, toe sareng jaringan sanés saatos dibeulah saderhana ku Lysis Buffer and Proteinase k.Taya nyerna sapeuting, ékstraksi fénol-chloroform atawa purifikasi kolom, nu basajan tur shortens waktu consuming percobaan.Produkna cocog pikeun amplifikasi fragmen target dugi ka 2kb sareng réaksi PCR multipleks kalayan dugi ka 3 pasang primer.2 × Mouse Tissue Direct PCR Mix ngandung DNA polimérase anu direkayasa genetik, Mg²⁺, dNTPs sarta sistem panyangga dioptimalkeun pikeun nyadiakeun efisiensi amplifikasi tinggi na kasabaran inhibitor, ku kituna réaksi PCR bisa dilaksanakeun ku nambahkeun template na primers na rehydrating produk ka 1 ×.Produk PCR amplified kalawan produk ieu boga nonjol "A" basa dina 3 'tungtung sarta bisa dipaké langsung pikeun TA kloning sanggeus purifikasi.

Komponén

Kaayaan Panyimpenan

Produk kudu disimpen dina -25 ~ -15 ℃ salila 2 taun.Saatos thawing, Lysis panyangga bisa disimpen dina 2 ~ 8 ℃ pikeun jangka pondok sababaraha pamakéan, sarta gaul ogé nalika maké.

Aplikasi

Produk ieu cocog pikeun analisis knockout mouse, deteksi transgenik, genotyping jeung saterusna.

Fitur

1.Operasi basajan: teu perlu nimba DNA génomik;

2.Aplikasi anu lega: cocog pikeun amplifikasi langsung tina sababaraha jaringan beurit.

parentah

1.Pelepasan DNA génomik

1) Persiapan lysate

Tissue lysate disusun dumasar kana jumlah sampel beurit anu bakal dilisekeun (tisu lysate kedah disiapkeun dina situs dumasar kana dosis sareng dicampur tuntas pikeun dianggo), sareng proporsi réagen anu diperyogikeun pikeun hiji conto nyaéta kieu:

2) Persiapan Sampel jeung Lysis

Disarankeun Pamakéan Tissue

Candak jumlah luyu sampel jaringan mouse dina tabung centrifuge bersih, tambahkeun 200μL jaringan seger lysate ka unggal tube centrifuge, vortex jeung ngocok, teras incubate dina 55 ℃ pikeun 30mins, lajeng panas dina 98 ℃ pikeun 3mins.

3) Centrifugation

Ngocok lysate ogé sarta centrifuge dina 12.000 rpm salila 5 menit.Supernatant bisa dipaké salaku template pikeun amplifikasi PCR.Lamun citakan diperlukeun pikeun neundeun, mindahkeun supernatant kana tube centrifuge steril sejen tur nyimpen dina -20 ℃ salila 2 minggu.

2.Amplifikasi PCR

Cabut 2×Tissue Tissue Direct PCR Mix tina -20 ℃ sareng ngalembereh dina és, campur tibalik sareng nyiapkeun sistem réaksi PCR numutkeun tabel di handap ieu (beroperasi dina és):

Catetan:

a) Jumlah ditambahkeun teu kudu ngaleuwihan 1/10 tina sistem, sarta lamun teuing ditambahkeun, amplifikasi PCR bisa jadi dipeungpeuk.

Disarankeun Kaayaan PCR

Catetan:

a) hawa Annealing: Kalawan rujukan ka nilai Tm tina primer, eta disarankeun pikeun ngeset suhu annealing ka nilai Tm leutik tina Primer + 3 ~ 5 ℃.

Masalah umum jeung Solusi

1.Taya strips sasaran

1) Produk lisis kaleuleuwihan.Milih jumlah paling luyu template, biasana teu leuwih ti 1/10 tina sistem;

2) Ukuran sampel badag teuing.Éncér lysate 10 kali lajeng ngagedekeun, atawa ngurangan ukuran sampel sarta ulang lysis;

3) Sampel jaringan henteu seger.Disarankeun ngagunakeun sampel jaringan seger;

4) Kualitas primér goréng.Anggo DNA génomik pikeun amplifikasi pikeun pariksa kualitas primer sareng ngaoptimalkeun desain primer.

2.amplifikasi non-spésifik

1) Suhu annealing rendah teuing sareng jumlah siklusna luhur teuing.Ningkatkeun suhu annealing sareng ngirangan jumlah siklus;

2) Konsentrasi template teuing tinggi.Ngurangan jumlah template atanapi éncér témplat 10 kali sanggeus amplifikasi;

3) spésifisitas primér goréng.Optimalkeun desain primér.

Catetan

1.Pikeun ngahindarkeun kontaminasi silang antara conto, sababaraha alat sampling kedah disiapkeun, sareng permukaan alatna tiasa dibersihkeun nganggo larutan natrium hipoklorit 2% atanapi pembersih asam nukléat saatos unggal sampling upami dianggo diulang.

2.Disarankeun ngagunakeun jaringan beurit seger, sareng volume sampling henteu kedah ageung teuing supados henteu mangaruhan hasil amplifikasi.

3.Lysis panyangga kedah ulah aya sering freeze-ngalembereh, sarta bisa disimpen dina 2 ~ 8 ℃ pikeun jangka pondok sababaraha pamakéan.Upami disimpen dina suhu anu handap, présipitasi tiasa kajantenan, sareng kedah leyur sapinuhna sateuacan dianggo.

4.Campuran PCR kedah ngahindarkeun sering beku-ngalembereh, sareng tiasa disimpen dina suhu 4 ℃ kanggo panggunaan anu diulang jangka pondok.

5.Produk ieu ngan ukur pikeun panalungtikan ékspérimén ilmiah sareng henteu kedah dianggo dina diagnosis atanapi perawatan klinis.