Robusstart Taq DNA Polimérase
Robustart Taq DNA Polimérase nyaéta polimérase DNA mimiti panas.Produk ieu teu ngan bisa hadé ngahambat réaksi non-spésifik disababkeun ku annealing non-spésifik tina primers atawa aggregation Primer dina prosés préparasi sistem PCR jeung Gedekeun.Ku alatan éta, spésifisitas alus teuing jeung leuwih éféktif pikeun amplifikasi témplat konsentrasi low, sarta éta cocog pikeun réaksi amplifikasi PCR multiplexed.Leuwih ti éta, produk ieu applicability pohara alus, sarta hasil Gedekeun stabil bisa didapet dina tipena béda réaksi PCR.
Komponén
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polimérase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ bébas) (opsional)
3.25 mM MgCl2(opsional)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bébas) henteu ngandung dNTP sareng Mg²+, mangga tambihan dNTP sareng MgCl2nalika nyiapkeun sistem réaksi.
Aplikasi anu disarankeun
1.Gedekeun gancang.
2.Gedekeun sababaraha.
3.Amplifikasi langsung getih, swab, sareng conto sanés.
4.Deteksi panyakit engapan.
Kaayaan Panyimpenan
-20 ° C pikeun neundeun jangka panjang, kudu dicampur ogé saméméh pamakéan, ulah sering freeze-ngalembereh.
* Lamun présipitasi lumangsung sanggeus refrigeration, éta normal;eta disarankeun pikeun equilibrate ka suhu kamar saméméh Pergaulan jeung pamakéan.
Harti Unit
Hiji unit aktif (U) dihartikeun salaku jumlah énzim nu ngasupkeun 10 nmol deoxyribonucleotide kana bahan asam-leyur dina 74 ° C salila 30 menit maké DNA spérma salmon diaktipkeun salaku citakan / primer.
Kontrol kualitas
1.SDS-PAGE purity electrophoretic leuwih gede ti 98%.
2.Sensitipitas amplifikasi, kontrol bets-to-batch, stabilitas.
3.Henteu aya kagiatan nuklease eksogen, teu aya kontaminasi endonuklease atanapi kontaminasi eksogen
parentah
Setup Réaksi
| Komponén | Volume (μL) | Konsentrasi ahir |
| 10 × PCR Buffer II (Mg²+ bébas)a | 5 | 1 × |
| dNTPs (10mM unggal dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robusstart Taq DNA Polimérase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25 × Primer campuranb | 2 | 1 × |
| Citakan | - | < 1 μg/réaksi |
| ddH2O | Ka 50 | - |
Catetan:
1) a.Panyangga teu ngandung dNTP sareng Mg²+, mangga tambihan dNTP sareng MgCl2nalika nyiapkeun sistem réaksi.
2) b.Lamun dipaké pikeun qPCR/qRT-PCR, panyilidikan fluoresensi kudu ditambahkeun kana sistem réaksi.Biasana, konsentrasi primer ahir 0,2 μM bakal masihan hasil anu saé;lamun kinerja réaksi goréng, konsentrasi primer bisa disaluyukeun dina rentang 0.2-1 μM.Konsentrasi usik biasana dioptimalkeun dina rentang 0.1-0.3 μM.Percobaan gradién konsentrasi bisa dipigawé pikeun manggihan kombinasi pangalusna tina primer jeung usik.
protokol Ngabuburit termal
| Biasa tina PCRprosés | |||
| Lengkah | Suhu | Waktos | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 1-5 mnt | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 10-20 detik | 40-50 |
| Annealing / Extension | 56-64 ℃ | 20-60 detik | |
| PCR gancangprosés | |||
| Lengkah | Suhu | Waktos | Siklus |
| Pra-denaturasi | 95 ℃ | 30 detik | 1 |
| Denaturasi | 95 ℃ | 1-5 detik | 40-45 |
| Annealing / Extension | 56-64 ℃ | 5-20 detik | |
Catetan
1.Laju amplifikasi DNA polimérase gancang teu kudu kurang ti 1 kb/10 s.Laju naékna sareng turunna suhu, mode kontrol suhu sareng efisiensi konduksi panas tina alat PCR anu béda-béda pisan, ku kituna disarankeun pikeun ngaoptimalkeun kaayaan réaksi anu optimal pikeun alat PCR gancang khusus.
2.Sistemna tiasa adaptasi pisan, kalayan spésifisitas sareng sensitipitas anu langkung luhur.
3.Cocog pikeun dianggo salaku réagen deteksi PCR sensitipitas luhur, sareng tiasa dianggo dina réaksi amplifikasi PCR multiplex.
4.5′→3′ aktivitas polimérase, 5′→3′ aktivitas exonuclease;euweuh aktivitas exonuclease 3′→5′;euweuh fungsi proofreading.
5.Cocog pikeun uji kualitatif sareng kuantitatif PCR sareng RT-PCR.
6.Tungtung 3′ produk PCR nyaéta A, anu tiasa langsung diklon kana véktor T.
7.Metoda tilu-hambalan disarankeun pikeun primers kalawan suhu annealing low atawa pikeun amplifikasi fragmen leuwih panjang batan 200 bp.
