Bst 2.0 DNA Polimérase (Gliserol bébas)
Bst DNA polimérase V2 diturunkeun tina Bacillus stearothermophilus DNA Polimérase I, anu miboga aktivitas polimérase DNA 5′→3′ jeung aktivitas ngagantian ranté kuat, tapi euweuh aktivitas exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 cocog pikeun strand-displacement, LAMP amplifikasi isothermal (Loop mediated isothermal amplification) sareng sekuen gancang.
Komponén
| Komponén | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimerase V2(Gliserol-gratis)(8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 panyangga | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikasi
1.LAMPU isothermal amplifikasi
2.DNA strand réaksi kapindahan tunggal
3.High GC sequencing gén
4.DNA sequencing tingkat nanogram.
Kaayaan Panyimpenan
Transportasi handapeun 0 ° C sarta disimpen dina -25 ° C ~ -15 ° C.
Harti Unit
Hiji unit dihartikeun salaku jumlah énzim nu ngasupkeun 25 nmol dNTP kana bahan teu leyur asam dina 30 menit dina 65 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kamurnian Protéin (SDS-PAGE):Kamurnian Bst DNA polymerase V2 nyaéta ≥99% ditangtukeun ku analisis SDS-PAGE ngagunakeun deteksi Coomassie Blue.
2.Kagiatan Exonuclease:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polimérase V2 jeung 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA salila 16 jam dina 37 ℃ ngakibatkeun degradasi teu bisa didéteksi sakumaha ditangtukeun.
3.Kagiatan Nickase:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 jeung 1 μg pBR322 DNA salila 16 jam dina suhu 37°C teu ngakibatkeun degradasi bisa didéteksi sakumaha ditangtukeun.
4.Kagiatan RNase:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 jeung 1,6 μg MS2 RNA salila 16 jam dina suhu 37 ° C teu ngakibatkeun degradasi dideteksi sakumaha ditangtukeun.
5.E. coli DNA:120 U tina Bst DNA polymerase V2 disaring pikeun ayana E. coli DNA génomik maké TaqMan qPCR kalawan primers husus pikeun E. coli 16S rRNA locus.Kontaminasi DNA génomik E. coli nyaéta ≤1 Salinan.
Réaksi LAMPU
| Komponén | 25μL |
| 10×HC Bst V2 panyangga | 2,5 l |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (masing-masing 10mM) | 3,5 l |
| SYTO™ 16 Héjo (25×)a | 1,0 μL |
| Campuran Primerb | 6 μl |
| Bst DNA Polimérase V2 (Gliserol bébas) (8 U/uL) | 1 μL |
| Citakan | × μL |
| ddH₂O | Nepi ka 25 μL |
Catetan:
1) a.SYTOTM 16 Héjo (25×): Numutkeun kabutuhan ékspérimén, dyes séjén bisa dipaké salaku substitutes;
2) b.Campuran Primer: diala ku nyampur 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB jeung jilid séjén.
Réaksi jeung Kaayaan
1 × HC Bst V2 Buffer, suhu inkubasi antara 60°C jeung 65°C.
Inactivation panas
80 ° C, 20 mnt
