Warm Start Bst 2.0 DNA Polymerase (Gliserol bébas)
Bst DNA polimérase V2 diturunkeun tina Bacillus stearothermophilus DNA Polimérase I, anu miboga aktivitas polimérase DNA 5′→3′ jeung aktivitas ngagantian ranté kuat, tapi euweuh aktivitas exonuclease 5′→3′.Bst DNA Polymerase V2 cocog pikeun strand-displacement, LAMP amplifikasi isothermal (Loop mediated isothermal amplification) sareng sekuen gancang.Bst DNA polymerase V2 mangrupakeun versi panas-start dumasar kana Bst DNA polymerase V2 (HC5005A) diala ku téhnologi modifikasi malik, nu bisa ngahambat aktivitas DNA polymerase dina suhu kamar, jadi sistem réaksi bisa dioperasikeun sarta dirumuskeun dina suhu kamar pikeun nyegah non -Gedekeun husus sarta ngaronjatkeun efisiensi réaksi, sarta versi ieu bisa lyophilized.Salaku tambahan, kagiatanana dileupaskeun dina suhu anu luhur, janten henteu peryogi léngkah aktivasina anu misah.
Komponén
| Komponén | HC5006A-01 | HC5006A-02 | HC5006A-03 |
Bst DNA polimérase V2 (Gliserol bébas) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2 panyangga | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2 × 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Aplikasi
1.LAMPU amplifikasi isothermal
2.Untaian DNA réaksi pamindahan tunggal
3.Sequencing gén GC tinggi
4.Urutan DNA tingkat nanogram.
Kaayaan Panyimpenan
Transportasi handapeun 0 ° C sarta disimpen dina -25 ° C ~ -15 ° C.
Harti Unit
Hiji unit dihartikeun salaku jumlah énzim nu ngasupkeun 25 nmol dNTP kana bahan teu leyur asam dina 30 menit dina 65 ° C.
Kontrol kualitas
1.Uji Kamurnian Protéin (SDS-PAGE):Kamurnian Bst DNA polymerase V2 nyaéta ≥99% ditangtukeun ku analisis SDS-PAGE ngagunakeun deteksi Coomassie Blue.
2.EndonukleaseKagiatan:Inkubasi réaksi 50 μL anu ngandung minimum 8 U Bst DNA polimérase V2 sareng 1 μg λDNA salami 16 jam dina suhu 37 ℃ henteu ngahasilkeun degradasi anu tiasa dideteksi sakumaha anu ditangtukeun.
3.Kagiatan Exonuclease:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polimérase V2 jeung 1 μg λ -Hind Ⅲ nyerna DNA salila 16 jam dina 37 ℃ ngakibatkeun degradasi teu bisa didéteksi sakumaha ditangtukeun.
4.Kagiatan Nickase:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 jeung 1 μg pBR322 DNA salila 16 jam dina suhu 37°C teu ngakibatkeun degradasi bisa didéteksi sakumaha ditangtukeun.
5.Kagiatan RNase:Inkubasi réaksi 50 μL ngandung minimum 8 U Bst DNA polymerase V2 jeung 1,6 μg MS2 RNA salila 16 jam dina suhu 37 ° C teu ngakibatkeun degradasi dideteksi sakumaha ditangtukeun.
6.E. coliDNA:120 U tina Bst DNA polymerase V2 disaring pikeun ayana E. coli DNA génomik maké TaqMan qPCR kalawan primers husus pikeun E. coli 16S rRNA locus.Kontaminasi DNA génomik E. coli nyaéta ≤1 Salinan.
Réaksi LAMPU
| Komponén | 25μL |
| 10×HC Bst V2 panyangga | 2,5 l |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (masing-masing 10mM) | 3,5 l |
| SYTO™ 16 Héjo (25×)a | 1,0 μL |
| Campuran Primerb | 6 μl |
| Bst DNA Polimérase V2 (Gliserol bébas) (8 U/uL) | 1 μL |
| Citakan | × μL |
| ddH₂O | Nepi ka 25 μL |
Catetan:
1) a.SYTOTM 16 Héjo (25×): Numutkeun kabutuhan ékspérimén, dyes séjén bisa dipaké salaku substitutes;
2) b.Campuran Primer: diala ku nyampur 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB jeung jilid séjén.
Réaksi jeung Kaayaan
1 × HC Bst V2 Buffer, suhu inkubasi antara 60°C jeung 65°C.
Inactivation panas
80 ° C, 20 mnt
