RT-lampu Colormetric Master Campur HCB5204A
Produk ieu ngandung panyangga réaksi, Campuran RT-Énzim (Bst DNA polimérase sareng transcriptase balik tahan panas), Protectants lyophilized sareng komponén pewarna kromogenik.Pikeun make, ngan make panyangga, énzim réaksi jeung primer dicampurkeun jeung ditambahkeun kana citakan;nambahkeun protectant lyophilized tiasa lempeng.Ieu disambungkeun ka lyophilizer na lyophilized, sarta ngan primers na template ditambahkeun nalika dipaké.Kit ieu nyayogikeun deteksi visual anu gancang sareng jelas ngeunaan amplifikasi, dimana réaksi négatip dituduhkeun dina warna beureum sareng réaksi positip dituduhkeun ku parobahan kana konéng.
Komponén
| Komponén | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Panyangga Amplifikasi anu dimédiasi ku loop (kalayan pewarna) | 0,96 ml | 4,80 ml × 2 | 9,60 mL × 10 |
| RT-Énzim Campur | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 mL × 10 |
| Protéksi lyophilized | 0,96 ml × 2 | 9,60 ml × 2 | 9,60 ml × 20 |
Aplikasi
Pikeun DNA atawa RNA amplifikasi isothermal.
Kaayaan Panyimpenan
Diangkut nganggo és garing, disimpen dina -25 ~ -15 ℃.Hindarkeun sering freeze-thaw, produk valid pikeun 12 bulan.
Protokol
1.Ngalembereh panyangga réaksi pikeun dipaké dina suhu kamar.Vortex sakeudeung atawa invert tabung sababaraha kali nyampur tuntas, lajeng centrifuge pikeun ngumpulkeun cairanana ka handap tabung.
2.Nyiapkeun sistem réaksi.Réagen ieu tiasa disiapkeun dina dua sistem réaksi, campuran réaksi cair sareng campuran sistem lyophilized.
1) Nyiapkeun campuran réaksi cair
| Komponén | Jilid |
| Panyangga Amplifikasi anu dimédiasi ku loop (kalayan pewarna) | 10 μL |
| RT-Énzim Campur | 2,8 l |
| 10 × Primer Campura | 5 μl |
| Témplat DNA/RNA b | × μL |
| Cai nukléase-gratis | Nepi ka 50 μL |
2) Campuran sistem Lyophilization
① Nyiapkeun campuran lyophilized
| Komponén | Jilid |
| Panyangga Amplifikasi anu dimédiasi ku loop (kalayan pewarna) | 10 μL |
| Protéksi lyophilized | 20 μL |
| RT-Énzim Campur | 2,8 l |
| Cai nukléase-gratis | Nepi ka 50 μL |
② Lyophilization: Campuran disusun ieu lyophilized dina sistem 50μL
③ Nyiapkeun campuran réaksi
| Komponén | Jilid |
| Campuran Lyophilized | 1 sapotong |
| 10 × Primer Campura | 5 μl |
| Témplat DNA/RNA b | × μL |
| Cai nukléase-gratis | Nepi ka 50 μL |
Catetan:
1) a.10×Primer Campuran: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (leyur cai) disarankeun pikeun templ asam nukléat.
1.Incubate dina 65 ° C pikeun 30-45mins, nu bisa diperpanjang appropriately nurutkeun robah warna waktu Réaksi.
2.Nurutkeun mata taranjang, konéng éta positif jeung beureum éta négatip.
Catetan
1.Uyah bisa muncul dina handapeun tube panyangga, vortex sakeudeung atawa invert tabung sababaraha kali nyampur tuntas dina suhu kamar.
2.Suhu réaksi bisa dioptimalkeun antara 62 ℃ jeung 68 ℃ nurutkeun kaayaan primers.
3.Réagen anu dibungkus henteu kedah kakeunaan hawa pikeun waktos anu lami.
4.Réaksi discoloration beureum jeung konéng gumantung kana parobahan pH tina sistem réaksi, punten ulah make solusi gudang asam nukléat Tris ngandung, dianjurkeun ngagunakeun ddH2O disimpen asam nukléat;
5.Percobaan kudu standar, kaasup persiapan sistem réaksi, lyophilization, sarta ngolah sampel sarta prosés nambahkeun sampel;
6.Pikeun ngahindarkeun kontaminasi, disarankeun pikeun nyiapkeun sistem réaksi dina bangku ultra-bersih, dina témplat Nambahkeun témplat ka tiung fume kamar pikeun nyegah gangguan positip palsu.
