DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) nyaéta endodeoxyribonuclease nu bisa nyerna DNA untai tunggal atawa ganda.Ieu mikawanoh sarta megatkeun beungkeut fosfodiester pikeun ngahasilkeun monodeoxynucleotides atawa single- atawa double-stranded oligodeoxynucleotides jeung gugus fosfat di 5′-terminal jeung hidroksil di 3′-terminal.Kagiatan DNase I gumantung kana Ca2+ sarta bisa diaktipkeun ku ion logam divalent kayaning Mn2+ jeung Zn2+.5mM Ca2+ ngajaga énzim tina hidrolisis.Dina ayana Mg2+, énzim bisa sacara acak mikawanoh sarta meulah situs mana wae dina untaian DNA.Ku ayana Mn2+, untaian ganda DNA bisa dipikawanoh sakaligus jeung dibeulah dina ampir situs nu sarua pikeun ngabentuk fragmen DNA tungtung datar atawa fragmen DNA tungtung caket kalawan 1-2 nukléotida nonjol.
Produk Harta
Bovine Pancreas DNase I dinyatakeun dina sistem éksprési ragi sareng dimurnikeun.
Componén
| Komponén | Jilid | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-gratis | 20 μL | 200 μL | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I panyangga | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Transportasi jeung Panyimpenan
1. Stabilitas gudang: - 15 ℃ ~ -25 ℃ pikeun neundeun;
Stabilitas 2.Transport: Angkutan handapeun bungkus és;
3. Disadiakeun dina: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% gliserol, pH 7,6 dina 25 ℃.
Harti Unit
Hiji unit didefinisikeun salaku jumlah énzim anu bakal nguraikeun lengkep 1 µg DNA pBR322 dina 10 menit dina suhu 37°C.
Kontrol kualitas
RNase:5U DNase I sareng 1,6 μg MS2 RNA salami 4 jam dina suhu 37 ℃ henteu ngahasilkeun degradasi anu ditangtukeun ku éléktroforésis gél agarose.
Baktéri Éndotoksin:LAL-test, nurutkeun Cina Pharmacopoeia IV 2020 édisi, gél wates test metoda, aturan umum (1143).Eusi éndotoksin baktéri kudu ≤10 EU/mg.
Parentah pikeun Paké
1.Prepare solusi réaksi dina tube RNase-gratis nurutkeun babandingan didaptarkeun di handap:
| Komponén | Jilid |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I panyangga | 1 μL |
| DNase I, RNase-gratis (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Nepi ka 10 μL |
2,37 ℃ salila 15 menit;
3.Tambahkeun panyangga terminasi pikeun ngeureunkeun réaksina, sareng panas dina 65 ℃ salami 10 menit pikeun nganonaktipkeun DNase I. Sampel tiasa langsung dianggo pikeun percobaan transkripsi salajengna.
Catetan
1. Anggo 1U DNase I per μg RNA, atanapi 1U DNase I kirang ti 1μg RNA.
2.EDTA kudu ditambahkeun kana konsentrasi ahir 5 mM ngajaga RNA ti keur didegradasi salila énzim inactivation.
