CHO HCP ELISA Kit
Métode ELISA immunosorbent One-step digunakeun dina uji ieu.Sampel anu ngandung CHOK1 HCP sakaligus ngaréaksikeun sareng antibodi anti-CHOK1 kambing anu dilabélan HRP sareng antibodi anti-CHOK1 anu dilapis dina piring ELISA, tungtungna ngabentuk komplék sandwich tina antibodi anu dilabélan antibodi-HCP fase padet.Antigen-antibodi unbound bisa dihapus ku ngumbah piring ELISA.Substrat TMB ditambahkeun kana sumur pikeun réaksi cukup.Ngembangkeun warna dieureunkeun sanggeus nambahkeun solusi eureun, sarta OD atawa nilai absorbance tina solusi réaksi dina 450/650nm dibaca ku maca microplate.Nilai OD atawa nilai absorbansi sabanding jeung eusi HCP dina leyuran.Ti ieu, konsentrasi HCP dina leyuran bisa diitung nurutkeun kurva baku.
Aplikasi
Kit ieu dianggo pikeun sacara kuantitatif ngadeteksi eusi résidu protéin sél host CHOK1 dina conto.
Componén
| S/N | Komponén | Konsentrasi | Kaayaan Panyimpenan |
| 1 | CHOK1 HCP Standar | 0,5 mg/mL | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti CHO HCP-HRP | 0,5 mg/mL | ≤-20 ℃, ngajaga tina cahaya |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, ngajaga tina cahaya |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Ngeureunkeun solusi | NA | RT |
| 6 | sealers microplate | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Adsorption tinggi pre-palapis Lempeng | NA | 2-8 ℃ |
Parabot Diperlukeun
| Consumables / Parabot | Pabrikan | Katalog |
| Maca microplate | Alat Molekul | Spéktra Max M5, M5e, atawa sarimbag |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf / 5355, atawa sarimbag |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, atawa sarimbag |
Panyimpenan sareng stabilitas
1.Angkutan dina -25~-15°C.
2.Kaayaan gudang ditémbongkeun saperti dina Table 1;komponén 1-2 disimpen ≤–20°C, 5-6 disimpen RT,3,4,7,8 disimpen dina 2-8 ℃;periode validitas nyaéta 12 bulan.
Parameter produk
1.Sensitipitas: 1ng/mL
2.Rentang deteksi: 3-100ng/mL
3.Precision: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.Cakupan HCP: > 80%
5.spésifisitas: Kit ieu universal sabab husus meta kalawan CHOK1 HCP bebas tina prosés purifikasi.
Persiapan réagen
1.PBST 0,05%
Candak 15 ml 20 × PBST 0,05%, éncér dina ddH2O, sarta dijieun nepi ka 300 ml.
2.1,0% BSA
Candak 1g BSA tina botol sareng éncér dina 100 ml PBST 0,05%, aduk dugi ka larut lengkep, sareng simpen dina suhu 2-8 ° C.Panyangga éncér anu disiapkeun sah salami 7 dinten.Disarankeun nyiapkeun sakumaha diperlukeun.
3.Solusi deteksi 2μg/mL
Candak 48μL tina 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP jeung éncér dina 11,952μL 1% BSA pikeun ménta konsentrasi ahir 2μg/mL solusi deteksi.
4.QC sarta Persiapan Standar CHOK1 HCP
| tabung No. | Aslina | Konsentrasi | Jilid | 1%BSA | total Jilid | Pamungkas |
| A | Standar | 0,5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Méja: Persiapan QC sareng Standar
Prosedur Assay
1.Nyiapkeun réagen sakumaha anu dituduhkeun dina "Persiapan Réagen" di luhur.
2.Candak 50μL standar, sampel sarta QCs (tingali Table 3) kana unggal sumur, lajeng nambahkeun 100μL solusi Deteksi (2μg/mL);Panutup piring kalayan sealer, sarta nempatkeun piring ELISA dina thermomixer nu.Inkubasi dina 500rpm, 25±3 ℃ salila 2 jam.
3.Balikkeun microplate dina tilelep tur Piceun solusi palapis.Pipet 300μL PBST 0,05% kana unggal sumur pikeun ngumbah piring ELISA sareng miceun solusina, sareng ulang cucian 3 kali.Balikkeun piring dina anduk kertas beresih jeung pat garing.
4.Tambahkeun 100μL substrat TMB (tingali Table 1) ka unggal sumur, segel plat ELISA, sarta incubate dina poék dina 25±3 ℃ salila 15 mnt.
5.Pipet 100 μL stop solution ke dalam masing-masing sumur.
6.Ukur absorbance dina panjang gelombang 450/650nm kalawan microplate maca.
7.Nganalisis data ku SoftMax atawa software sarimbag.Plot kurva standar ku ngagunakeun modél régrési logistik opat-paraméter.
Conto Kurva Standar
CATETAN: Upami konsentrasi HCP dina sampel ngaleuwihan wates luhur kurva standar, éta kedah éncér leres sareng panyangga éncér sateuacan tés.
CATETAN
Solusi eureun nyaéta 2M asam sulfat, mangga nanganan kalayan ati-ati pikeun nyegah splashing!
